СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ДВУХ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ МОДЕЛЕЙ ПРИОБРЕТЕННОЙ ТОКСИЧЕСКОЙ ГЕМОЛИТИЧЕСКОЙ АНЕМИИ ПРИ ВВЕДЕНИИ 2-БУТОКСИЭТАНОЛА И ФЕНИЛГИДРАЗИНА

Введение. Широкое применение промышленных ядов в промышленности и сельском хозяйстве определяет высокую частоту и неблагоприятные исходы отравлений данными веществами. Расширяющееся с каждым годом внедрение химических соединений в различные виды промышленности, быта и науки создает предпосылки для повышения частоты возникновения гемолитической анемии у населения [10, 11, 12]. Все гемолитические яды первоначально вызывают раздражение костного мозга с появлением ретикулоцитоза и нейтрофильного лейкоцитоза, вслед за которыми проявляется гемолитическое действие препарата, выражающееся в постепенном снижении количества эритроцитов и в меньшей степени - гемоглобина [5]. Действие яда сопровождается также нарушениями функций многих органов и систем; наблюдается увеличение селезенки и печени [2].

Токсическая гемолитическая анемия – это группа заболеваний, при которых гемолиз эритроцитов обусловлен воздействием химических веществ, биологических ядов и бактериальных токсинов [8]. Лекарственная гемолитическая анемия возникает вследствие аутоиммунной реакции организма, при этом нередко лекарственные средства являются гаптеном, которые, связываясь с белками плазмы, образуют антиген [9]. После диссоциации этого комплекса на поверхности эритроцитов остается комплемент. В других случаях лекарственные средства прочно связываются с неповрежденными эритроцитами [7]. Антитела реагируют с токсичными веществами, повреждая эритроциты и вызывая их гемолиз. Данный вид лекарственной гемолитической анемии возникает при введении больших доз токсических веществ. Картина крови приобретенной гемолитической анемии характеризуется малым количеством эритроцитов (до 10 6 в 1 мкл) и низким содержанием гемоглобина - 20-30%. В периферической крови наблюдается значительный ретикулоцитоз и нормоэритробластоз, а также гиперлейкоцитоз с ядерным сдвигом влево (до миелоцитов). В пунктате костного мозга отмечается резкая эритробластическая реакция [1].

Гемолитические яды, фенилгидразин и 2-бутоксиэтанол, обладают выраженным гемолитическим эффектом и весьма широко применяются в различных отраслях промышленности.

Фенилгидразин – гемолитический яд, вызывающий распад эритроцитов и лейкоцитов крови, а также превращение гемоглобина в метгемоглобин. В опыте Евразийского национального университета имени Л.Н. Гумилева было доказано его токсическое действие с изменением картины периферической крови за счет поражения печени фенилгидразином и с проявлением активации перекисного окисления липидов, которое угнетает функции многих внутренних органов [13]. Фенилгидразин широко используется в экспериментальной медицине для моделирования гемолитической токсической анемии.

2-бутоксиэтанол – растворитель, используемый в органическом синтезе для производства лакокрасочных материалов и моющих средств, в качестве пропанта и диспергента в нефтяной промышленности. Было доказано токсическое действие 2-бутоксиэтанола на организм человека и животных, а также выраженный гемолитический эффект на эритроциты крыс и некоторых других видов млекопитающих, в том числе и человека [6]. Действие in vivo в настоящее время не доказано.

Цель исследования: оценка и сравнительный анализ клеточного состава красного костного мозга и периферической крови экспериментальных животных при моделировании приобретенной токсической гемолитической анемии, вызванной 2-бутоксиэтанолом и фенилгидразином - веществами с гемолитическим эффектом, которые являются промышленными ядами.

Материалы и методы. Проведено две серии экспериментов: I – введение экспериментальным животным 2-бутоксиэтанола, II - введение фенилгидразина. Исследования проводились на 80 нелинейных крысах. В первом эксперименте животные были разделены на две группы: контрольная группа (n=20) содержалась в стандартных условиях вивария, опытной (n=20) вводили однократно интраперитонеально бутоксиэтанол в дозе 20 мг/кг. Во втором эксперименте животные также были разделены на 2 группы, контрольная группа (n=20) содержалась в стандартных условиях вивария, опытной (n=20) вводили однократно интраперитонеально фенилгидразин в дозе 20 мг/кг.

Эксперименты проводились в соответствии с «Правилами лабораторной практики в Российской Федерации», утвержденными приказом Министерства здравоохранения РФ № 708н от 23.08.2010 г. и «Европейской конвенцией о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях» (Страсбург) от 18.III.1986 (Текст изменен в соответствии с положениями Протокола (ETS № 170), после его вступления в силу 2 декабря 2005 года; Лиссабонский договор о внесении изменений в Договор о Европейском союзе и Договор об учреждении Европейского сообщества вступили в силу 1 декабря 2009 года) в ЦНИЛ ГОУ ВПО ПГМУ им. ак. Е.А. Вагнера.

До эксперимента и через 10 дней у контрольной и опытных групп животных забирали кровь из хвостовой вены с проведением анализа клеточного состава. Показатели периферической крови определяли при помощи гематологического автоматического анализатора Medonic M20, производство Boule Medical A.B., Швеция. Через 10 дней животных выводили из эксперимента с соблюдением правил эвтаназии, мазки красного костного мозга, полученные из бедренной кости, окрашивали красителем-фиксатором Майн-Грюнвальда и по Романовскому-Гимзе, микроскопировали под иммерсией, проводили подсчет миелограмм. На основании данных миелограммы были подсчитаны следующие показатели: лейко-эритробластическое отношение и индекс созревания эритрокариоцитов.

Статистическую обработку полученных данных осуществляли с использованием приложения Biostat и Microsoft ® Excel полнофункционального офисного пакета Microsoft Office 2007.

Результаты. Лейко-эритробластическое отношение (ЛЭО) вычисляется как отношение суммы процентного содержания всех лейкоцитов к общему содержанию всех ядерных элементов эритроидного ряда - от пронормобласта до зрелых форм. В контрольной группе ЛЭО составлял 4,22, в опытных группах: при введении 2-бутоксиэтанола ЛЭО составлял 11,49 (p=0,128), при введении фенигидразина - 5,35 (p=0,202) (рис.1).

Рисунок 1. Показатели лейкопоэза животных контрольной и двух опытных групп (2-бутоксиэтанол и фенилгидразин).

Индекс созревания эритрокариоцитов (ИСЭ) - отношение количества гемоглобинсодержащих нормобластов. В контрольной группе ИСЭ составлял 0,85, в опытных группах: при введении 2-бутоксиэтанола ИСЭ составлял 0,94 (p=0,02), при введении фенигидразина - 0,84 (p=0,836). Статистически значимое увеличение клеток эритроидного ростка наблюдается при введении 2-бутоксиэтанола (рис. 2).

Рисунок 2. Показатели эритропоэза животных контрольной и двух опытных групп (2-бутоксиэтанол и фенилгидразин).

При проведении анализа показателей периферической крови животных с введением фенилгидразина и 2-бутоксиэтанола установлено, что в опытных группах наблюдалось статистически значимое снижение концентрации гемоглобина, количества эритроцитов и увеличение числа ретикулоцитов.

Установлено, что введение фенилгидразина и 2-бутоксиэтанола сопровождается увеличением показателя MCH, показателя MCV и показателя RDW, снижением показателя MCHС (табл. 1).

Таблица 1

Сравнительный анализ показателей периферической крови животных

контрольной и двух опытных групп (2-бутоксиэтанол и фенилгидразин), (M±m)