§1.Зарегистрировать в таблице результаты реакции Райта. Сформулировать и записать вывод: указывают ли результаты реакции на на­личие заболевания бруцеллезом у данного больного?

§5.Рассмотреть невооруженным глазом и под малым увеличением микроскопа колонии сибиреязвенных палочек (вакцинный штамм сти).

Приготовить, окрасить по Граму и зарисовать препарат из культу­ры авирулентной палочки сибирской язвы.

Регистрация результатов реакции Райта.

Рис.1 Возбудитель чумы Yersinia pestis

Рис.2 Возбудитель туляремии Francisella tularensis

Рис.3 Возбудитель сибирской язвы Bacillus anthracis

Контрольные вопросы.

Каковы морфологические особенности палочки чумы и ее культуральные свойства? Что такое пестин и для какой цели он применяется?

Какой материал берется для бактериологического исследования при различных клинических формах чумы?

Какие микробиологические методы используются для диагностики чумы?

Каковы основные пути заражения человека возбудителем чумы?

Как осуществляется специфическая профилактика чумы?

Какие признаки используют для дифференциации возбудителя чумы от возбудителя ложного туберкулеза грызунов?

Какие подвиды чумных бактерий Вы знаете?

Каковы морфологические культуральные и биохимические свойства возбудителя туляремии?

Какой материал берется от больного при различных клинических формах туляремии? Каковы особенности выделения возбудителя туляремии от больного человека?

Какие микробиологические методы используются для диагностики ту­ляремии?

Методы микробиологической диагностики чумы.

Материал: от больных - пунктат из бубона, мокрота, кровь из вены;

от трупов - кусочки органов, лимфоузлы, кровь, костный мозг.

В. Аллергический (для ретроспективной диагностики)

Проба с пестином.

Г. Применение иммунологических реакций для обнаружения антигенов возбудителя (РПГА и ее модификации, ИФМ, РИМ).

Методы микробиологической диагностики туляремии.

А. Бактериологический и биологический

Материал: пунктат из бубона, гной из конъюнктивы, пленка из зева

Реакция агглютинации по типу реакции Райта (с 10-12 дня заболевания)

Аллергическая проба с тулярином – накожная и внутрикожная (с 5-7 дня заболевания).

Методы микробиологической диагностики сибирской язвы.

Материал: тканевой выпот из-под струпа и со дна язвы, кровь, мокрота, испражнения.

Исследуемый материал (см. метод А)

В. Реакция термопреципитации Асколи.

Проба с антраксином.

Как осуществляется серологическая диагностика туляремии?

Какие препараты используются для аллергической диагностики ту­ляремии? Как ставятся и оцениваются аллергические реакции?

На какой день заболевания рекомендуется ставить реакцию агглю­тинации и аллергическую пробу при туляремии?

Каковы морфология, культуральные свойства и устойчивость во внешней среде возбудителя сибирской язвы? Как дифференцируется си­биреязвенная палочка от антракоидов и псевдосибиреязвенных бакте­рий?

Какой материал берется для исследования при сибирской язве?

Какие микробиологические методы используются для диагностики сибирской язвы?

Как осуществляется проверка животного сырья на зараженность си­биреязвенными палочками?

Каковы общие правила взятия, пересылки материала и лаборатор­ного режима при особо опасных инфекциях? В чем заключаются особен­ности работы с больными чумой и зараженными животными?

Какой иммунопрепарат используется для специфической терапии си­бирской язвы и как он применяется?

Какие вакцины используются для профилактики чумы, туляремии и сибирской язвы и как они применяется?

Какое заболевание у людей вызывает возбудитель псевдотуберкулеза?

Приложение к занятию 4

А. Иерсинии - возбудители псевдотуберкулеза (Yersinia pseudotuberculosis) и кишечного иерсиниоза (Y.enterocolitica)

Эти два вида иерсиний играют значительную роль в патологии че­ловека. Бактерии представляют собой полиморфные, не образующие спор грамотрицательные палочки, имеющие часто овоидную форму. Клетки в старых культурах окрашиваются неравномерно. Бактерии псевдотуберкулеза, взятые с влажного агара, могут иметь биполярную окраску, об­разуют капсулу, но с различной степенью выраженности. Оба вида бак­терий обладают подвижностью, обусловленной наличием перитрихиальных жгутиков. Подвижность выявляется посевом в столбик полужидкого агара уколом, но только при 18-20º , при 37° подвижность отсутствует.

Иерсинии неприхотливы к питательным средам, хорошо растут на обычных универсальных средах, способны активно размножаться в почве и воде. Оптимальная для роста температуре 30º С, верхняя и нижняя границы роста составляют 43° С и 0-2° С соответственно, оптимум рН 6,6-7,8. На среде Эндо колонии имеют диаметр 0,1-0,2 мм, круглые вы­пуклые, блестящие с ровными краями, бесцветные (не ферментируют лак­тозы). Колонии возбудителя псевдотуберкулеза, находящиеся в R-форме, почти не отличаются от колонии возбудителя чумы (пигментированный центр и фестончатый "кружевной" край). Биохимические различия трех видов иерсиний представлены в таблице.

Все три вида иерсиний отличаются и по своим антигенным свой­ствам.

Возбудитель псевдотуберкулеза по 0-антигенам разделяется на восемь групп (1-8) с 20 0-факторными антигенами (1-20). По 0-и Н-антигенам (а-е) этот вид подразделяют на 13 сероваров и подсероваров (la, 1в, 2а, 2в, 2с, 3, 4а, 4в, 5а, 5в, 6, 7, 8).

Иерсиния энтероколитика характеризуется антигенной неоднород­ностью по 0-антигену. В настоящее время различают более 30 сероваров этого вида. Большинство из них адаптированы к некоторым видам животных или широко распространены во внешней среде. Подавляющее большинство штаммов, выделенных от человека, принадлежат к сероварам 03 и 09, реже встречаются серовары 08, 05в и очень редко - серовары 01, 02, 06, 07, 010, 011, 013, 014, 015, 016, 017.

От людей, больных псевдотуберкулезом, чаще всего выделяются штаммы, относящиеся к Серовару 1, реже 3 и 4.

В ходе эволюции у иерсиний закрепилась необходимость существо­вания в двух средах обитания - внешней (сапрофитическая фаза жизни) и в организме теплокровных животных и человека (паразитическая фаза). Для осуществления паразитической стадии иерсинии должны проникнуть в организм теплокровного животного. Заражение возбудителем псевдо­туберкулеза чаще всего происходит при употреблении в пищу инфициро­ванных иерсиниями продуктов, хранившихся при пониженной температу­ре (4-12ºС) в холодильниках и овощехранилищах. В этих условиях бак­терии в силу своей психрофильности могут размножаться и накаплива­ться в пищевых субстратах.

Иерсинии при пониженной температуре обладают высоким потенциа­лом клеточной и тканевой инвазивности и способны сохранять высокий уровень вирулентности, однако возбудитель может проникнуть в орга­низм человека и через любые слизистые оболочки, вероятно, за счет неспецифических механизмов.

Основным источником иерсиниозов являются дикие и синантропные грызуны, домашние и сельскохозяйственные животные. Возможно зара­жение человека от человека. Штаммы Y.pseudo-tuberculosis выделены от 175 видов млекопитающих, 124 видов птиц, 7 видов рыб. Зараженные грызуны, животные и люди выделяют возбудителя с испражнениями и мо­чой, загрязняя воду, растения и другие объекты внешней среды. Таким образом, пищевой путь в передаче возбудителей псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза является ведущим. Заражение происходит в ре­зультате употребления в пищу сырых или недостаточно термически обра­ботанных продуктов (мяса, мясных продуктов, молока, овощей, фруктов, зелени). Оба вида возбудителя способны существовать внутри растений (салата, гороха, овса и т.п.).

Заболевания, вызываемые иерсиниями, характеризуются полиморфностью клинических проявлений, поражением желудочно-кишечного тракта, тенденцией к генерализации, септикопиемии и поражению различных ор­ганов и систем.

Патогенные свойства иерсиний обоих видов, как и возбудителя чу­мы, во многом определяются наличием у них плазмид с молекулярной массой 42-48 МД и 82 МД. Плазмиды контролируют такие свойства возбу­дителей, как зависимость роста от наличия в среде кальция, способ­ность синтезировать антигены вирулентности (v-w), пили адгезии, спо­собность вызывать керато-конъюнктивит у морской свинки и т.п.

Микробиологическая диагностика иерсиниозов включает использо­вание бактериологического метода и серологических реакций.

При бактериологическом методе исследуемый материал от больных (испражнения, кровь, слизь из зева), а также подозрительные продук­ты или воду засевают на среды Эндо, Плоскирева, Серова (индикатор­ную и дифференциальную) и инкубируют при 37° в течение 48-72 часов.

Подозрительные колонии (мелкие бесцветные на средах Эндо и Плоскирева и окрашенные колонии двух различных форм на средах Серова) пересевают для получения чистых культур, которые идентифицируют по биохимическим признакам и окончательно типируют с помощью диагности­ческих агглютинирующих сывороток.

Для серологической диагностики псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза используют развернутую реакцию агглютинации (по типу реакции Видаля) с соответствующими диагностикумами или реакцию пас­сивной гемагглютинации (РПГА) с антигенным эритроцитарным диагностикумом. Положительными считают реакции при титре антител 1:400 и вы­ше. Реакции рекомендуется ставить с парными сыворотками (с интерва­лом в несколько дней). Нарастание титра антител будет свидетельство­вать о специфичности инфекционного процесса.

Б. Классификация вида Yersinia pestis (Саратов, 1985)

Y. pestis subsp. pestis - основной подвид

Y. pestis subsp. altaica - алтайский подвид

Y. pestis subsp. caucasica - кавказский подвид

Y. pestis subsp. hissarica - гиссарский подвид

Y. pestis subsp. ulegeica - улэгейский подвид

В. Особенности генетического контроля факторов

патогенности у возбудителя чумы.

Контроль наиболее важных факторов патогенности возбудителя чу­мы осуществляется плазмидами, на которых локализованы гены вирулентности. Известны три класса плазмид, контролирующих различные факто­ры патогенности возбудителя: рУР (м.м.6 МД); рУТ (м.м. 60 МД) и рУV (м.м. 47 МД).

Плазмида рУР (6 МД) несет гены, определяющие синтез пестицина. фибринолизина и плазмокоагулазы.

Плазмида рУТ (60 МД) несет детерминанты, контролирующие синтез антигена фракции I и "мышиного" токсина.

Плазмида рУV (47 МД) ответственна за синтез антигенов v и w и термоиндуцибельных белков внешней мембраны, а также зависимость роста чумной палочки от наличия в среде ионов Са++.