Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему: Эпизоотология и вакцинопрофилактика некробактериоза северных оленей в Республике Саха (Якутия)
Автореферат диссертации по ветеринарии на тему Эпизоотология и вакцинопрофилактика некробактериоза северных оленей в Республике Саха (Якутия)
На правах рукописи
Мачахтыров Иннокентий Григорьевич л
Эпизоотология и вакцинопрофилактика некробактериоза северных оленей в Республике Саха (Якутия)
16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология
Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук
На правах рукописи
Мачахтыров Иннокентий Григорьевич
Эпизоотология и вакцинопрофилактика некробактериоза северных оленей в Республике Саха (Якутия)
16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология
Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук
Работа выполнена в лаборатории Всероссийского научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко, Якутской государственной сельскохозяйственной академии и в оленеводческих хозяйствах МСХ и 3 Республики Саха (Якутия).
Караваев Юрий Дмитриевич - заслуженный деятель науки РФ, лауреат премии Совета Министров СССР, доктор ветеринарных наук, профессор, заведующий отделом эпизоотологии, диагностики и профилактики болезней овец и других видов животных ВИЭВ.
Бутковский Владимир Федорович - кандидат ветеринарных наук, с.н.с, доцент факультета ветеринарной медицины ЯГСХА.
Чекишев Валерий Михайлович - доктор ветеринарных наук, профессор.
Хоч Афанасии Андреевич - доктор ветеринарных наук.
Ведущая организация - Дальневосточный зональный научно-исследовательский ветеринарный институт. /
Защита состоится « » 2000 года в часов ш
заседании диссертационного совета К 120.29.02. при Якутской государственной сельскохозяйственной академии по адресу: 677002 г.Якутск, ул.Красильникова, 15.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Якутской госу дарственной сельскохозяйственной академии.
Автореферат разослан « /¥ » 2000 года.
Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат ветеринарных наук, доцент
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы: Оленеводство является основным источником обеспечения северных народов мясом, теплой одеждой, обувью и сырьем для местной промышленности.
Известно, что только оленеводство вовлекает в оборот возобновляемые природные ресурсы севера, которые не могут быть использованы никакими другими видами сельскохозяйственных животных.
В то же время развитию данной отрасли препятствует ряд факторов, в том числе некробактериоз северных оленей, который наносит ощутимый экономический ущерб оленеводческим хозяйствам всех форм собственности.
По вопросам общей и специфической профилактики некробакте-риоза животных имеется ряд работ отечественных и зарубежных исследователей.
Одни авторы утверждают, что путем обработки антигенами из культуры некрофоруса чувствительных животных можно вызвать у них иммунитет (Г.Ревнивых, 1932; R.Katie, 1976; M.Katrinka, 1979, 1981; В.А. Жирков, И.О.Соломаха с соавт., 1988).
Другие (Н.И. Писаренко,1973; Ф.И. Каган, Л.В. Кириллов, 1976) придерживаются противоположной точки зрения.
До настоящего времени производству не были предложены достаточно эффективные средства иммунопрофилактики и лечения некро-бактериоза северных оленей и других видов животных.
Борьба с заболеванием проводилась путем проведения комплекса ветерннарно-санитарных, профилактических и лечебных мероприятий, которые являются трудоемкими и малоэффективными.
В 1994 году сотрудниками ВИЭВ доктором ветеринарных наук, профессором Ю.Д. Караваевым и кандидатом ветеринарных наук И.Н. Семеновой была разработана высокоиммуногенная инактивиро-ванная эмульсин вакцина против некробактериоза животных.
Указанная вакцина с положительными результатами была апробирована на крупном рогатом скоте и овцах в центральных регионах России, а проблема иммунопрофилактики некробактериоза северных оленей на Крайнем Севере оставалась не изученной.
Цель работы: Изучение особенностей эпизоотического процесса и эффективности вакцинопрофилактики некробактериоза северных оленей в условиях Республики Саха (Якутия).
1. Изучить характер эпизоотического процесса некробактериоза северных оленей в Республике Саха (Якутия).
2. Провести апробацию инактивированной эмульгированной вакцины против некробактериоза животных на северных оленях в условиях Якутии.
Научная новизна и практическая ценность работы:
1. В условиях Республики Саха (Якутия) выявлены особенности возникновения, распространения и симптоматики некробактериоза северных оленей.
2. Установлена высокая эффективность специфической профилактики заболевания на основе использования инактивированной эмульгированной вакцины против некробактериоза животных.
3. Применение указанной вакцины в специфических условиях республики позволяет профилактировать вспышки некробактериоза в стадах северных оленей, а также способствует выздоровлению больных животных.
Внедрение результатов исследований.
В ветеринарную практику Республики Саха (Якутия) внедрена система мер борьбы и профилактики некробактериоза северных оленей, основными элементами которой являются иммунизация инактивированной эмульгированной вакциной против некробактериоза животных и использование методов и средств активной терапии.
На основе результатов исследований подготовлены методические рекомендации по применению вакцины против некробактериоза на северных оленях, утвержденные научно-техническим Советом ЯГСХА, которые учтены при разработке инструкции по мерам борьбы и профилактики с некробактериозом животных.
Основные положения, выносимые на защиту.
1. Материалы изучения краевой эпизоотологии некробактериоза северных оленей в различных природно-климатических зонах Республики Саха (Якутия).
2. Результаты апробации средств терапии и специфической профилактики некробактериоза северных оленей.
3. Экономическая эффективность иммунизации оленей вакциной против некробактериоза.
Апробация работы: Эмульгированная инактивированная вакцина против некробактериоза животных применялась в оленьих стадах Абыйского, Алданского, Анабарского, Булунского, Кобяйского, Момского, Оленекского, Олекминского и Усть-Янского улусов Республики Саха (Якутия).
Результаты исследований доложены на коллегии Департамента ветеринарии РС (Я) ( 22.12.1998 г.), в Департаменте ветеринарии РФ, ВИЭВ, на научно-практической конференции ЯГСХА, посвященной Году Арктики (22.04.1998 г.).
Объем работы: Диссертация изложена на 132 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических предложений, списка использованной литературы и приложений. Список использованной литературы включает 148 источников, из них 30 иностранных.
Материал и методика исследований
Диссертационная работа выполнена в лаборатории эпизоотологии, диагностики и профилактики болезней овец ВИЭВ, на кафедре паразитологии и эпизоотологии ЯГСХА и в неблагополучных по некро-бактериозу оленей хозяйствах Арктического региона Республики Саха (Якутия) в 1996-1999 годах (Анабарском, Абыйском, Булунском, Ко-бяйском, Оленекском, Момском, Усть-Янском улусах).
Эпизоотическую ситуацию по некробактериозу оленей изучали в 19 улусах республики путем анализа статистических материалов Департамента ветеринарии МСХ и 3 PC (Я) за последние 10 лет, а также по результатам собственных исследований. Было проведено эпизоотоло-гическое обследование неблагополучных хозяйств в 4 природно-климатических зонах Якутии.
Диагноз на некробактериоз ставили комплексно, включая лабораторный метод.
Для выделения возбудителя некробактериоза нами был использован патологический материал:
- пораженные конечности от 15 трупов северных оленей из совхоза «Момский», стадо отделения «Соболоох», ГУП «Момский» Момского улуса;
- пораженные конечности от 6 вынужденно убитых оленей ГУП «Приморский», стадо № 2 Булунского улуса.
Патологический материал, полученный от больных, вынужденно убитых и павших животных доставляли в лабораторию в термосе со льдом. В лабораторных условиях готовили суспензию из пораженного материала в МПБ в соотношении 1 : 5 из которой делали посевы на среду Китта-Тароцци, кровяной агар Цейсслера и кровяной сахарный агар, а также готовили мазки для световой и люминесцентной микроскопии.
Реакцию иммунофлуореценции проводили в непрямом варианте (T.Weller, A.Coons, 1954). При этом фиксированный мазок помещали во влажную камеру, на дно которой укладывали фильтровальную
бумагу, смоченную дистиллированной водой. На первом этапе окраски использовали цельную гипериммунную сыворотку крови кролика.
Экспозиция составляла 45 минут при 37 иС.
Затем мазки промывали дважды по 10 минут 0,15 М раствором хлористого натрия, подсушивали и наносили люминисцирующую сыворотку против глобулинов кролика, производства института эпидемиологии и микробиологии имени Н.Ф. Гамалеи. Препараты помещали в термостат при 37 °С во влажной камере, после чего промывали 0,15 М раствором хлористого натрия и дистиллированной водой в течение 10 мин. После подсушивания мазков на стекло наносили глицериновый буфер рН - 8,0 (1 часть 0,15 М раствора хлористого натрия рН - 8,0 на 9 частей глицерина), накладывали покровное стекло и сверху не флуоресцирующее иммерсионное масло. Мазки просматривали в люминисцентном микроскопе МЛ-3, окуляр 5х, объектив 90, опертура 1.25, светофильтры: входной УФС -6 и теплозащитный СЗС-24.
Яркость свечения оценивали в крестах:
++++ - очень яркая люминисценция по периферии микробной клетки, четко контрастируемая с телом клетки. Результат положительный.
+++ - яркая люминисценция периферии микробной клетки, контрастирующая с телом. Результат положительный.
++ - слабая люминисценция периферии микробной клетки. Результат сомнительный.
+ - едва заметная люминисценция периферии микробной клетки. Результат сомнительный.
- - люминисценция микробной клетки отсутствует. Результат отрицательный.
В качестве контролен использовали:
1. Мазки из патологического материала, окрашенные люми-нисцирующей сывороткой, без предварительной обработки гипериммунной сывороткой;
2. Мазки из патологического материала, обработанные гипериммунной сывороткой, без последующей окраски люминисци-рующей сывороткой;
3. Мазки из патологического материала, обработанные в первой фазе нормальной кроличьей сывороткой, во второй - люми-нисцирующей сывороткой.
Во всех контролях специфическое свечение отсутствовало. Для посева брали не менее 5 срезов пораженных и прилегающих к ним здоровых тканей. По результатам микроскопии отбирали суспензию с наибольшим содержанием в ней возбудителя некробактериоза. Каплю выбранной суспензии засевали на плотные питательные среды, дробно штриховали разводками шпателем. В процессе работы нами были использованы: кровяной сахарный агар и кровяной агар Цейс-слера.
Посевы инкубировали в анаэробных условиях (в анаэростате). Воздух откачивали медленно в течение 45 минут, а после этого в анаэро-стат впускали углекислый газ. Крышку анаэростата закрывали герметично. Посевы инкубировали в течение 3 суток, после чего чашки Петри просматривали визуально и с помощью лупы (х2). Из колоний с характерной морфологией готовили мазки и просматривали под световым микроскопом. При обнаружении характерных для возбудителя некробактериоза колоний производили отсев на среду Китта-Тароцци. Перед засевом среду Китта-Тароцци нагревали на водяной бане и быстро охлаждали для удаления накопившегося в ней кислорода.
Одновременно с посевом суспензии с наибольшим содержанием возбудителя некробактериоза мы заражали этой же суспензией подкожно, кроликов в области основания уха в дозе 1,0 мл и белых мышей в области корня хвоста в дозе 0,5 мл.
Изолированные из биогенного материала от северных оленей и лабораторных животных культуры подвергались морфологическому и культурно-биохимическому исследованию по общепринятой методике.
При лечении некробактериоза северных оленей в сравнительном аспекте на 345 животных применяли кламоксил ЬА, террамицин спрей и инакти-вированную эмульгированную вакцину против некробакте-
риоза животным, разработанную во ВИЭВ под руководством профессора Караваева Ю.Д.
Эффективность указанной вакцины при специфической профилактике некробактериоза северных оленей устанавливали в экспериментальных и производственных условиях.
В качестве лабораторной модели для определения безвредности и специфической активности вакцины использовали 40 белых мышей живой массой 18-20 г.
В условиях производства безвредность вакцины определяли на 40 оленях 6-8 месячного возраста в ГУП «Себян» Кобяйского улуса.
Противоэпизоотическую эффективность инактивированной эмульгированной вакцины против некробактериоза животным устанавливали в 1996-98 гг. комиссионно в неблагополучных улусах на 21162 оленях.
Материалы исследований подвергнуты статистической обработке по методике Лебедева П.Т, и Усовича А.Т. (1969. С.404- 408).
РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
Эпизоотическая ситуация по некробактериозу северных оленей
Согласно анализа ветеринарной статистики за последние годы нек-робактериоз северных оленей получил широкое распространение во всех оленеводческих хозяйствах Республики Саха (Якутия).
В ¡987 году в 21 улусе вспышка болезни отмечалась в 74 неблагополучных пунктах, где в 183 оленеводческих стадах заболело 50918 оленей. Подвергнуто лечению 50918 оленей, из них выздоровело 40667. Эффективность лечения составила 79,9 % , пало 10251 олень, что составляет 20,1 % от числа заболевших, в том числе из павших оленей тугутов ( молодняк ) было 4380 .
В 1988 году в 8 улусах было зарегистрировано 52 неблагополучных пункта. Некробактериоз отмечался в 215 оленеводческих стадах, где
заболело 49314 оленей, из них было вылечено 36555, что составляет 74,1 %, пало 12759, т.е. 25,8%.
В 1989 году в 18 улусах имелось 44 неблагополучных пункта, где в 183 стадах заболело 37579 оленей, было вылечено 23798, эффективность лечения составила 77,3 % , пало 7027 оленей, летальность равняется 18,6%.
В 1990 году в 5 улусах, в 157 стадах, в 39 неблагополучных пунктах заболело 20951 олень, выздоровело 14951, эффективность лечения составляет 70,4 %. Из числа заболевших пало 6207 оленей, отход равнялся 29,6 %, в том числе тугутов пало 1119.
В 1991 году в 13 улусах в 91 неблагополучном пункте заболело 43110 оленей, из них было вылечено 29852 (68%), пало 13874, летальность составляла 32,1 %.
В 1992 году заболевание регистрировалось в 10 неблагополучных пунктах, в 4 улусах. Всего заболело 26609 оленей, из них пало 1456, т.е. 5,4 %.
В 1993 году некробактериоз северных оленей регистрировался в 13 арктических улусах республики, где заболело 18976 оленей, из них пало 3347 (17,6%).
В 1994 году в 13 улусах было 85 неблагополучных пунктов, в которых заболело 25457 оленей, из них пало 6477, что составляет 25,1 %.
В 1995 году в 4 улусах имелось 26 неблагополучных пунктов, где заболело 21231 олень, из них пало 7003, отход равен 32,9 %.
В 1996 году в 8 улусах в 22 неблагополучных пунктах всего заболело 9812 оленей, из них пало 2523, отход составил 25,7 %.
В 1997 году в 12 улусах было 79 неблагополучных пунктов, где заболело 10449 оленей, пало 2744, летальность составила 26,2 %.
В 1998 году в 12 улусах имелось 50 неблагополучных пунктов, где некробактериозом заболело 13699 оленей, из них пало 2999 или 21,8%.
Таким образом за 10 лет некробактериозом заболело в 522 неблагополучных пунктах 269504 оленя, из них пало 69396, летальность составила 25,7%.
При изучении степени распространения некробактериоза в Якутии в зависимости от природно-климатических условий установлено, что в оленьих стадах, выпасающихся летом в приморско-тундровой и лесо-
тундровой зонах, заболевание наблюдается в 2-3 раза чаще, чем в горно-складчатых и таежных зонах.
За последние годы особенно неблагополучными по некробактерио-зу оказались оленеводческие родовые общины Аллаиховского, Булун-ского, Момского и Оленекского улусов республики.
Эпизоотологическое обследование улусов показало, что зимовка в 1994 - 1998 годы проходила в трудных условиях, олени выходили на летовку истощенными, а телята слабыми. Весна была запоздалой, холодной, а на оленьих пастбищах образовывалась ледяная корка. В начале июня наблюдался обильный снегопад, зелень появилась только в начале июля при резком повышении температуры воздуха, которое сопровождалось массовым выплодом комаров, нарушавших нормальный режим кормления, водопоя и отдыха животных, что способствовало возникновению некробактериоза оленей. При наступлении жарких дней, эпизоотия быстро распространялась, охватывая почти все стада родовых общин.
Проведенные исследования подтвердили стационарность некробактериоза оленей в неблагополучных пунктах в условиях Якутии. Так, в оленеводческих хозяйствах арктических улусов и южной зоне некробактериоз оленей регистрируется ежегодно. Изменяются только показатели заболеваемости и летальности. Уровень летальности высок во всех 4 природно-климатических зонах Якутии и достигает до 42,5; 68,4 и 59,8 % в отдельных улусах (Анабарский, Оленекский, Нижнеколымский ).
По результатам системного ветеринарного наблюдения, вспышка некробактериоза на территории Якутии падает в основном на июль -август месяцы.
Поданным анализа заболеваемости оленей некробактериозом за 10 лет установлено, что 60 % заболевших животных приходилось на июль, 20 % на август и по 10 % на июнь и сентябрь месяцы. Это связано с тем, что короткое северное лето сопровождается резким повышением температуры воздуха, а не заходящее за горизонт солнце благоприятствует быстрому развитию не только полезных для оленей явлений в природе (бурный рост трав, зеленых кустарников - обильный
корм), но и вредных (появление огромного количества слепней, комаров, оводов, сильно беспокоящих животных).
В начале лета олени находят большие массивы снега по склонам оврагов и берегам многочисленных тундровых речек и озер, где их мало беспокоят насекомые, а в июле - августе они лишены такой защиты.
В жаркое время стада, застигнутые на открытом месте слепнями и оводами, начинают «кружиться». В это время олени полностью вытаптывают поверхностный слой земли, превращая его в грязное месиво. Кружение на тандере (месте отдыха) по вязкому каменистому грунту способствует появлению различных травм, мацерации кожи нижних частей конечностей, обламыванию копыт, растяжению связок суставов и их отеку, что сопровождается заносом возбудителя инфекции.
При наличии таких неблагоприятных факторов первые случаи нек-робактериоза возникают среди телят, а затем поражается поголовье более старшего возраста.
В условиях Якутии по берегам Ледовитого океана вспышки некробак-териоза возникают реже, чем в лесотундровой зоне. Так, по показателям ряда последних лет эпизоотии некробактериоза в хозяйствах Булунского улуса, расположенных по побережью Ледовитого океана отмечались реже, чем в Оленекском улусе, находящемся в лесотундровой зоне.
С наступлением холодной, ветряной погоды прекращается лет насекомых, исчезают другие неблагоприятные факторы, и некробактери-оз оленей затухает.
ВЫДЕЛЕНИЕ И ИЗУЧЕНИЕ ЭПИЗООТИЧЕСКИХ ШТАММОВ V. ОДСНОРНОШМ
Исследование биогенного материала, выделение и изучение биологических свойств возбудителя некробактериоза проводилось на базе ВИЭВ.
Первая культура возбудителя некробактериоза нами была выделена из пораженной конечности павшего северного оленя, принадлежащего ГУП «Момский», стаду «Тихон» отд. Соболох. Патологический материал был доставлен в лабораторию диагностики и профилактики овец ВИЭВ в термосе со льдом. Все операции, проводимые с колонией,
т.е изучение морфологии и ее отвивку делали с помощью бинокулярного микроскопа МБИ - 3.
Непрямым методом реакции иммунофлуоресценции была подтверждена идентичность микроорганизмов, выросших в колонии с возбудителем некробактериоза.
Одновременно с посевом были заражены кролики и белые мыши.
У кролика на месте введения суспензии под кожу ушной раковины в дозе 1 мл через 20-24 часа отмечался воспалительный отек, постепенно захватывающий ближайшие здоровые ткани. У основания уха уже через три дня появилась флюктуирующая припухлость, кожа истончилась и образовался свищ, а потом язва. В дальнейшем наступили парез уха и некроз мышц головы. Кролик пал на 11 сутки после заражения.
После вскрытия трупа стерильной пастеровской пипеткой произвели посевы на среду Китта - Тароцци из некротизированных тканей уха, внутренних органов и головного мозга.
В посевах на средах Китта - Тароцци, МПА и МПБ рост смешанной культуры был установлен на 2 сутки в пробах легких, печени и с места введения суспензии. В то же время посевы из головного мозга оставались стерильными. Чистая культура была выделена из сердца кролика и условно обозначена М 0 -1.
Вторая культура была изолирована из пораженного копыта северного оленя ГУП «Приморский». При выделении второй культуры стерильно взятый материал из пораженного копыта сначала высевали на среду Китта - Тароцци и по мере выявления роста делали мазки, окрашивали по Граму и проводили бактериоскопию. При этом была получена смешанная культура, в которой наряду с возбудителем некробактериоза встречались кокки, биополяры и другие формы микроорганизмов.
Для выделения чистой культуры мы заразили кролика подкожно у основания уха в дозе 0,1 мл содержимым той пробирки, в которой преобладали микробные клетки, морфологически похожие на возбудителя некробактериоза.
У зараженного кролика наблюдались такие же характерные для некробактериоза изменения , как у кролика использованного для выделения первой культуры. Кролик пал на 9 сутки. Последовательность выделения была такой же, как и при изоляции первой культуры.
Чистая культура была получена через 24 часа после посева. Выделенную культуру обозначили М 0- 2.
Изолированные культуры были идентифицированы согласно определителю микроорганизмов Д.И. Вергсу (1986) как Р.песгорИогит.
Р.песгорЬогит спор и капсул не образовывал, был неподвижен, рос в анаэробных условиях, окрашивался по Граму отрицательно и довольно хорошо анилиновыми красками. При окраске была заметна тонкая структура клетки - ее зернистость. Нити и палочки красились неравномерно, по всей длине часто встречались бесцветные участки.
При изучении культуральных свойств Р.песгорЬогит использовали следующие питательные среды: плотные с содержанием 3 % агара и полужидкие МППБ с кусочками печени (среда Китта - Тароцци).
На плотной питательной среде с кровью лошади поверхностный рост Р.песгорЬогит отмечался через 2-3 суток, первоначально в виде росинок, а в дальнейшем колонии увеличивались до 1 - 3 мм и принимали ярко очерченные формы.
На среде Китта - Тароцци культуры давали рост через 24 - 36 часов. В начале происходило помутнение нижних слоев пробирки, а затем всего столбика среды. У штамма М 0 - 1 и М 0 - 2 отмечалось газообразование. У всех культур через 2 суток роста наступала самоагглютинация: кусочки печени покрывались слизистым серым налетом, через 7-10 суток наступало полное просветление среды.
В своей работе в сравнительном аспекте мы изучали биохимические и протеолитические свойства выделенных нами культур и эталонных штаммов, хранящихся в лаборатории эпизоотологии, диагностики и профилактики болезней овец ВИЭВ.
При определении протеолитических свойств культур изучали их способность образовывать индол и сероводород, разжижать желатин.
При изучении биохимических свойств культуры, ее засевали на среду Китта - Тароцци с 0,5 % содержанием углеводов или многоатомного спирта (арабиноза, лактоза, фруктоза, глюкоза, галактоза, инулин, глицерин, маннит, ксилоза, мальтоза, сахароза, сорбит) с индикатором Андреде.
Посевы выращивали при Т-37 °С в течение 17 суток.
Все полученные штаммы образовали индол и сероводород, а также выделяли при культивировании на среде Китт - Тароцци газ. Особенно обильное выделение газа отмечалось у свежих культур, а у старых культур газообразование не наблюдали. Ни одна изученная культура не свертывала молоко и не разжижала желатин.
С целью изучения патогенных свойств штаммов возбудителя нек-робактериоза использовали 6 кроликов массой 2,5 - 3 кг и 6 белых мышей весом 18-20 гр. Кроликам вводили суточную культуру в дозе 0,5 - 1,0 мл, а белым мышам 0,2-0,5 мл содержащих в 1 мл 1 млн мкр. тел. Контрольным животным вводили стерильный физиологический раствор. После заражения ежедневно проводили клинический осмотр в течение 30 суток.
Заражение кроликов и белых мышей проводили подкожно: кроликов в область уха, а белых мышей в корень хвоста.
На месте введения культуры через сутки отмечался небольшой инфильтрат, увеличивающийся с каждым днем и достигший у штамма 0 -2 размера голубиного яйца.
Все исследуемые культуры были патогенны для лабораторных животных и в дозе 0,5 мл убивали белых мышей. Контрольные животные остались живыми в течение всего срока наблюдения.
Всех павших мышей и кроликов вскрывали, делали посевы на кровяной агар Цейсслера и среду Китта - Тароцци, культивировали в
термостате при 37 °С, а также проводили люминесцентную и световую микроскопию.
Через 24 часа на среде Китта - Тароцци культуры давали рост, вначале происходило помутнение в нижних слоях среды, а затем столбика среды и отмечалось интенсивное газообразование.
На кровяном агаре через 3 суток поверхностный слой был в виде росинок, а в дальнейшем колонии увеличивались в диаметре до 3 мм, принимали ярко очерченные формы, при этом штаммы вызывали гемолиз эритороцитов.
В мазках из культур обнаруживали грамотрицательные микроорганизмы, а при иммуннолюминесцентной микроскопии выявляли микробные клетки с яркой люминесценцией по периферии.
Таким образом, результаты исследований свидетельствуют о том, что изолированные нами штаммы возбудителя некробактериоза обладают характерными для данного вида биологическими признаками, аналогичным эталонным штаммам Р.песгорЬошт, а показания РИФ полностью совпадают с данными высевов.
Апробация средств терапии и специфической профилактики некробактериоза северных оленей
Целью нашей работы являлось испытание новых для северных условий препаратов кламоксила ЬА, террамицина спрей и инактивиро-ванной эмульгированной вакцины против некробактериоза животных на больных оленях с лечебной целью.
При этом нами было проведено клиническое обследование стада № 1 ГУП «Жилиндинский» Оленекского улуса с поголовьем 1507 оленей и выявлено 345 больных некробактериозом животных , из них взрослых 308, молодняка 37. Диагноз был подтвержден в ЯРВИЛ, экспертиза № 65 от 25 июля 1996 года.
Для выяснения лечебной эффективности антибиотиков и вакцины против некробактериоза животных было сформировано 3 группы больных оленей.
Показатели эффективности средств лечения при некробактериозе оленей
№ Средства терапии Количество Выздоровело Эффектив-
1. Террамицпн аэрозоль 115 89 77,3
Контрольная группа 15 - 0
П. Кламоксил ЬА 105 80 76,0
Контрольная группа 15 - 0
111. Вакцина против
некробактериоза ¡25 ! 25 ¡00,0
Контрольная группа 20 0
Первую группу оленей в количестве 115 голов лечили террамицин аэрозолем с двухразовым нанесением препарата, в контрольной группе оставили 15 больных животных.
Из 115 оленей, подвергнутых лечению террамицин аэрозолем, выздоровели 89, т.е. 77,9% , а 15 контрольных животных остались больными.
Вторую группу в количестве 105 голов обрабатывали препаратом кламоксил ЬА.
При этом из 105 больных некробактериозом оленей выздоровело 80, лечебная эффективность составили 76,0%.
Среди оленей контрольной группы выздоровления не отмечалось.
Третьей группе оленей ввели внутрикожно лечебную дозу инакти-вированной эмульсии вакцины против некробактериоза животных. Из 125 оленей, все животные выздоровели через 10-12 дней.
Изучение безвредности и иммуногенности инактивированной вакцины против некробактериоза животных в экспериментальных условиях
На первом этапе исследований нами в качестве лабораторной модели для определения безвредности и специфической активности вакцины были использованы белые мыши живой массой 18-20 гр.
Вакцину вводили подкожно в области спины в дозе 0,2 мл десяти белым мышам, при этом в течение 10 дней не отметили ни одного случая заболевания и гибели животных.
Для определения иммуногенной активности вакцину вводили 20 белым мышам живой массой 18-20 грамм подкожно в дозе 0,2 мл. Через 10 дней после иммунизации 20 вакцинированных и 20 мышей контрольной группы заражали подкожно в область спины подтитрован-ной летальной дозой контрольного штамма Р.песгорЬогиш (0,1 мл суспензии, в 1 мл которой содержалось 20 млрд. микробных тел). Результаты исследований представлены в таблице 2.
Результаты шучишш иммумогенности вакцины прошв нскробакгсриоза животных на белых мышах
№ Группа мышей Количество Заболело Пало Выживаемость, %
1 Опытная 20 2 2 90
2 Контрольная 20 18 18 10
Как видно из таблицы, в течение 10-дневного срока наблюдения в опытной группе заболело и пало 2 мыши, а в контрольной - 18. Выживаемость мышей соответственно составляла 90 и 10%.
На следующем этапе безвредность вакцины определялась в производственных условиях. В опыт было взято 40 голов молодняка оленей 6- 8 месячного возраста ГУП «Себян» Кобяйского улуса.
В период наблюдений (июль - август) температура воздуха отмечалась в пределах + 25- 28 °С, содержание оленей было пастбищное.
Вакцину вводили внутрикожно с помощью безигольного инъектора в области средней трети шеи в нарастающих дозах с 0,2 мл до 10 кратного превышения иммуногенной дозы. Было взято 8 доз по 0,2; 0,4; 0,6; 1,0; 1,2; 1,6; 1,8; 2,0 мл. Каждой дозой вакцины прививали по 5 оленей и вели клиническое наблюдение в течение 30 дней.
Результаты исследований показали, что на месте инъекции высоких доз вакцины у оленей образуется безболезненная припухлость размером с горошину тестоватой консистенции, которая исчезает через 4-7 дней.
Местная и общая температура у животных не повышалась, признаков угнетения и каких-либо клинических симптомов заболевания не наблюдалось.
Полученные экспериментальные данные свидетельствовали о безвредности и достаточно высокой иммуногенности инактивированной вакцины против некробактериоза животных.
В Кобяйском улусе ГУП «Себян» было вакцинировано 1100 голов оленей, осложнений не отмечалось.
Результаты апробации вакцины против иекробактериоза за 1997-98 гг.
Улусы Всо о вакцинировано Осложнения Заболело С лечебной целью Пало и! иакциниров.
1997 1998 1997 1998 1997 1998 1997 1998 1997 1998
1 Оленек скнй 5(5 1287 160 16 160 16 ■ ■ 70
2 Момс-кнй 189 800 26 - 22 189 - 17 5
3 Усгь-Янсюш 897 450 100 ■ ■ 14 ■ ■ *
4 Кобян скин 1 100 1200 24 20 - - - 29
Всего: 2701 3737 - 310 16 202 219 - 17 104
В 1997 году в 79 неблагополучных пунктах, где вакцинация не проводилась, некробактериозом заболело 10449 оленей, из них пало 2744, что составляет 26,2 %. Ущерб от падежа составил 3101 млн рублей.
В 1998 году испытание данной вакцины проводилось в 11 арктических улусах республики на 16366 оленях. Осложнения в виде припухлости наблюдались у 885 оленей, заболело некробактериозом 182, пало ! 11 оленей. Эффективность вакцинации составила 98,9 %.
Таким образом, результаты апробации инактнвированной эмульгированной вакцины против некробактерпоза животных в условиях Республики Саха (Якутия) свидетельствуют о достаточной ее эффективности и целесообразности применения в других оленеводческих регионах России.
1. Ретроспективными исследованиям. проведенными за 1988 - 1999 годы, некробактериоз северных олене)") установлен в 19 улусах Республики Саха (Якутия): Алданском, Абыйском. Анабарском, Аллаихов-ском, Булунском, Верхоянском, Верхнеколымском, Жиганском,
Испытание вакцины против некробактериоза животных в производственных условиях
В 1996 году была проведена апробация данной вакцины в Булун-ском, Оленекском, Олекминском и Момском улусах республики, стационарно неблагополучных по некробактериозу северных оленей. Всего было охвачено вакцинацией 2095 животных, из них заболело легкой формой некробактериоза 23, падежа среди вакцинированного поголовья не отмечалось.
Эффективность от вакцинации составляет 97,1 %.
В шести контрольных стадах Оленекского улуса с общим поголовьем 4724 головы, заболело некробактериозом 1295 оленей, т.е. 26 % от общего поголовья, из них пало 514 .
Всего в 1996 год по республике вспышки некробактериоза были отмечены в 22 неблагополучных пунктах, где заболело 8912 оленей, из них пало 2523 (25,7 %). Экономический ущерб составляет 2851 млн рублей.
В 1996 году в ходе испытания вакцины были выявлены следующие её недостатки:
а) отмечались поствакцинальные осложнения в виде абцессов на месте введения вакцины, в частности, из 2095 вакцинированных оленей у 299 были осложнения, что составляло 14,2 %;
б) необходимость ревакцинации через 25 - 30 дней;
в) вакцина густая и тягучая, с трудом проходит через иглу шприца.
Выявленные недостатки дали авторам вакцины основание для усовершенствования препарата и продолжения производственной апробации.
На первом этапе испытания модернизированной вакцины были проведены в 1997 г. в Оленекском улусе на 515 оленях.
В Усть-Янском улусе было вакцинировано 897 голов оленей, а 14 оленям, больным некробактериозом, вакцина была применена с лечебной целью, при этом все животные выздоровели.
В Момском улусе вакцина была использована для лечения 189 оленей, больных некробактериозом, из них пало 17, остальные выздоровели, осложнений не наблюдалось.
Кобяйском, Момском, Нерюнгринском, Нижнеколымском, Олекмин-ском, Оленекском, Оймяконском, Среднеколымском, Томпонском, Усть - Янеком и Эвено -Бытантайском.
2. Заболеваемость оленей некробактериозом в хозяйствах Республики Саха (Якутия) за последние 10 лет составляет 25,6 - 55%, летальность колеблется от 5 до 31,6 %.
3. Массовые вспышки болезни отмечаются в приморской и лесотундровой зонах республики, преимущественно в июле - августе, с наступлением жаркой погоды и массового лета кровососущих насекомых.
4. При бактериологическом исследовании патологического материала от северных оленей из неблагополучных по некробактериозу хозяйств Якутии выделено 2 штамма бактерий М0-1 и М0-2, которые идентифицированы как микроорганизмы семейства Вас1его1с1асеае, род РизоЬас1егшт, вид Р.песгор1югит.
5. Симтомокомплекс болезни при естественном заражении оленей характеризуется гнойно-некротическими поражениями кожи конечностей и внутренних органов.
6. В качестве лабораторной модели при оценке безвредности и им-муногенности инактивированной вакцины против некробактериоза животных могут быть использованы белые мыши. При подкожном введении, вакцина в дозе 0,2 мл была безвредной для мышей, а при последующем их заражении в дозе 2,0 млрд.микробных тел выживаемость опытной группы составила 90 %, при 90 % гибели в контрольной группе.
7. Результаты широкой производственной апробации инактивированной вакцины против некробактериоза животных в неблагополучных оленеводческих хозяйствах Республики Саха (Якутия) свидетельствуют о ее высокой профилактической и терапевтической эффективности. Из 21162 вакцинированных оленей заболело 260, т.е. 1,25 %, из них пало 141, т.е. 0,6 %. В контрольных группах заболело 33960 оленей, из них пало 8266, заболеваемость составляет - 47,5 % , летальность - 24,3 %.
8. Экономическая эффективность ветеринарных мероприятий с применением инактивированной вакцины против некробактериоза
животных в 5 неблагополучных улусах республики составляет 215,86 рублей на 1 рубль затрат (цены на 10 августа 1998 года).
1. В качестве лабораторной модели при оценке безвредности и им-муногенности вакцины против некробактериоза предлагаем использовать белых мышей.
2. В комплекс лечебно-профилактических мероприятий по борьбе с некробактериозом северных оленей в Республике Саха (Якутия) и других оленеводческих регионах Российской Федерации рекомендуем включить применение эмульсии вакцины против некробактериоза животных разработанной лабораторией ВИЭВ.
3. Методические рекомендации по применению вакцины для профилактики и лечения некробактериоза северных оленей в Республике Саха (Якутия), утвержденные научно-техническим Советом ЯГСХА 4 июня 1999 года, были использованы при разработке инструкции по мерам борьбы и профилактики с некробактериозом животных.
Список работ, опубликованных по теме диссертации:
1. Караваев 10.Д., Семенова И.Н., Каратаева Т.Д., Мачахтыров И.Г., Шейко В.И. Современная стратегия и тактика по борьбе с некробактериозом северных оленей. - М., 1997 // Животноводство. № 6. С.25 - 27.
2. Караваев Ю.Д., Семенова H.H., Волохова А., Каратаева Т.Д.,Мачахтыров И.Г., Шейко В., Зииина Л., Проскурин Ю, Ярцев В. -Специфические средства лечения и профилактики некробактериоза // Ветеринарная газета. Спецвыпуск 4. М., 1998. С. 2.
3. Караваев 10.Д., Мачахтыров И.Г. - Некробактериозу можно сказать «нет» // Животновод. № 7. 1998. С. 24 - 25.
4. Мачахтыров И.Г., Каратаева Т.Д. - Апробация инактивирован-ной эмульгированной вакцины против некробактериоза животных на северных оленях в условиях Якутии // Сборник тезисов докладов науч-
но-практической конференции ЯГСХА, посвященной Году Арктики. -Якутск. 1998. С. 15-17.
5. Мачахтыров И.Г. - Эффективность применения инактивирован-ной эмульгированной вакцины против некробактериоза животных на северных оленях // Сборник тезисов докладов научно-практической конференции ЯГСХА, посвященной Году Арктики. - Якутск, 1998. С. 18-19.
6. Каратаева Т.Д., Мачахтыров И.Г., Замьянов ИД. Краткие сведения о природно-климатических условиях Якутии, характеристика отрасли оленеводства и её ветеринарное обслуживание // Информационный бюллетень «Оленеведение». № 1. Якутск. 1999. С. 24 - 35.
7. Караваев Ю.Д., Семенова И.Н., Мироне//ко А.К., Л.Н.Зшшна, Тетеричев В.И., Мачахтыров И.Г. Терапия и специфическая профилактика при некробактериозе //Ветеринария. № 8. 1999. С. 11 - 12.