СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ АНТИАРИТМИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ПРЕПАРАТА III КЛАССА КАРДИОЦИКЛИДА И ЕГО ХИМИЧЕСКОГО АНАЛОГА АЛ-298

AnnotationIn the experiments on anesthetized dogs, the comparative study was carried out of antiarrhythmic properties and electrophysiological mechanisms of action of two chemical compounds from the family of dicyclohexylamides of aminocarbonic acids, namely: cardiocyclide and AL-298.

Несмотря на то, что клиника располагает большим количеством антиаритмических препаратов, поиск новых высокоэффективных средств остается актуальной задачей. Многим современным антиаритмикам свойственны недостатки, основными из которых являются небольшая широта терапевтического действия и аритмогенность. После исследований CAST I и II (1989-1992) [24, 25], показавших, что длительное применение антиаритмиков I класса у пациентов, перенесших инфаркт миокарда, приводит к возрастанию смертности, внимание исследователей привлекали препараты III класса – блокаторы калиевых каналов [22]. Их эффективность при нарушениях ритма сердца связана с удлинением реполяризации и, как следствие, возрастанием рефрактерности. Механизм действия большинства известных в настоящее время антиаритмических препаратов III класса, таких как сематилид, d-соталол, дофетилид, связан с блокадой быстрого компонента калиевого тока задержанного выпрямления (IKr). Этим объясняется их частотно-зависимый эффект, а также способность проявлять аритмогенное действие [11].

В ГУ НИИ фармакологии РАМН в течение нескольких лет проводился поиск новых высокоэффективных соединений в ряду дициклогексиламидов аминокарбоновых кислот, проявляющих антиаритмическое действие [21]. В результате изучения зависимости «структура-действие» было отобрано два наиболее активных соединения под шифрами АЛ-275 и АЛ-298, представляющие интерес для дальнейших исследований [6]. АЛ-275 в последствии получил название кардиоциклид [2].

Целью настоящей работы явилось сравнительное изучение антиаритмических свойств и электрофизиологических механизмов действия двух химических аналогов из ряда дициклогексиламидов аминокарбоновых кислот - кардиоциклида и АЛ-298.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Для сравнительной оценки антиаритмической активности изучаемых соединений использовали методы определения максимально воспроизводимой частоты сокращений сердца и порога фибрилляции желудочков в опытах на наркотизированных кошках (n=5 для каждой серии) [3]. Вещества вводили в эквимолярных дозах (0,004мМ/кг).

Изучение рецепторного связывания оцениваемых соединений проводили на мембранах сердца и мозга крыс, выделенных по методу P.B.Timmermans [26]. Влияние препаратов на связывание [3H]-дигидроалпренолола ([3H]-ДГА) с b 1-адренергичесскими рецепторами сердца крыс изучали по методу R.J.Lefkowitz [18], [3H]-хинуклидинилбензилата ([3H]-ХНБ) с М1-мускариновыми рецепторами мозга крыс по методу R.J.Lefkowitz с модификациями [18]. Взаимодействие препаратов с местами специфического связывания имипрамина в тромбоцитах человека изучали по методу А.М.Фоменко и др. [7]. Влияние препаратов на обратный нейрональный захват серотонина (5-ОТ) в тромбоцитах человека исследовали по методу О.С.Брусова и др. [1]. Вытеснение радиолигандов проводили при концентрациях, близких к величинам их констант диссоциации (Kd). Специфическое связывание было равно 70% для [3H]-ХДБ, 42% для [3H]-ДГА, 90% для [3H]-5-OT. Определение величины IC50 (концентрации препарата, вызывающей 50% ингибирование специфического связывания радиолиганда с рецепторами) проводили по методу наименьших квадратов с помощью компьютерной программы «Statistica, version 6». Использовали реактивы фирмы «Sigma» (США), а также отечественные реактивы квалификации «х.ч.» или «ч.д.а.».

Электрофизиологические механизмы действия соединений изучали в опытах на наркотизированных собаках весом 8-15 кг, используя модель позднего инфаркта миокарда. Собак брали в опыт через 3-5 дней после двухстепенной перевязки коронарной артерии [12]. Животных наркотизировали и вскрывали грудную клетку в 4-м межреберье слева. Через бедренную артерию вводили зонд-электрод, который устанавливали в луковице аорты для регистрации электрограммы пучка Гиса. Другой электрод-зажим устанавливали на ушке левого предсердия для регистрации электрограммы левого предсердия и стимуляции. Третий биполярный электрод с расстоянием между электродами 5 мм погружали в толщу левого желудочка в области нормального (неинфарцированного) миокарда для регистрации электрограммы левого желудочка и стимуляции. Для регистрации ЭКГ в II и III отведениях и электрограмм пучка Гиса, предсердий и желудочков и стимуляции использовали компьютерный комплекс Astrocardв (Россия).

Программа стимуляции включала: 1) частую стимуляцию предсердий прерывающимися сериями из 10 импульсов нарастающей по 10 имп/мин частотой (метод S1S1); 2) стимуляцию предсердий одиночными преждевременными импульсами с постоянной частотой базового ритма (метод S1S2). Использовались частоты, соответствующие длительности интервалов между стимулами 350, 300 и 250 мс; 3) стимуляцию желудочков одиночными преждевременными стимулами (метод S1S2) на фоне навязанного базового ритма. Более подробно программа стимуляции описана ранее [4].

После завершения контрольного исследования вводили один из изучаемых препаратов: кардиоциклид (5 мг/кг) или АЛ-298 (2,6 мг/кг), (n=5). Для обоих соединений использовалась максимально эффективная доза, которая была определена в ранее проведенных исследованиях. Дальнейшее повышение дозы считали нецелесообразным, так как наблюдалось выраженное снижение артериального давления и развитие брадикардии. Начиная с 10-ой минуты после введения, повторяли программную электростимуляцию. Для статистической обработки результатов, полученных под влиянием препарата у одного животного, использовали парный t-тест. Для сравнения результатов, полученных у разных животных, использовали парный t-тест для двух выборок, предполагая дисперсии неравными. Результаты представляли в виде M±S. Статистически значимым считали различие при P<0,05.

В опытах на наркотизированных кошках кардиоциклид уменьшает максимально воспроизводимую частоту на 24,5%±4,3 (Р<0.05). Порог фибрилляции под влиянием кардиоциклида возрастает в 9,17±1,7 раз (P<0.05). АЛ-298 снижает максимально воспроизводимую частоту сердечных сокращений на 48,3%±13,6 (P<0.05) и повышает порог фибрилляции более чем в 10 раз.

Результаты исследования взаимодействия изучаемых соединений с М1-мускариновыми холинэргическими рецепторами коры мозга крыс и с b 1-адренергическими рецепторами сердца крыс представлены в табл. 1.

Таблица 1. Связывание кардиоциклида и АЛ-298 с мембранными рецепторами и влияние на обратный захват 5-ОТ (IC50, мкМ).